吖啶酯DMAE-NHS的發(fā)光動力學(xué)

吖啶酯DMAE-NHS的發(fā)光為閃光，0.4s時發(fā)光強(qiáng)度達(dá)到zui大，前2s鐘內(nèi)發(fā)光強(qiáng)度下降很快，此后下降比較慢，發(fā)光半衰期約為0.9s。DMAE-NHS的發(fā)光動力學(xué)性質(zhì)不受DMAE-NHS濃度的影響，改變DMAE-NHS濃度只影響發(fā)光強(qiáng)度的大小，但不影響其達(dá)到zui大發(fā)光強(qiáng)度的時間和半衰期。

吖啶酯DMAE-NHS的發(fā)光強(qiáng)度

DMAE-NHS的動力學(xué)檢測范圍為1.25×10-11~1.25x10-17mol，發(fā)光強(qiáng)度為6.11×1018cps/mol或1.03×107cps/ng。用DMAE-NHS標(biāo)記TSH單克隆抗體，DMAE-NHS與Ab的分子比為2.4的情況下，實(shí)驗(yàn)測得DMAE-NHS-Ab的發(fā)光強(qiáng)度為1.8×1019cps/molAb或1.125×105cps/ngAb。DMAE-NHS-Ab的動力學(xué)檢測范圍為1.0×10-12~1.0×10-18mol。

發(fā)光啟動試劑對DMAE-NHS發(fā)光強(qiáng)度的影響

吖啶酯發(fā)光通常采用的發(fā)光啟動試劑有三種配方：

二種物質(zhì)的配方是H2O2和NaOH；

三種物質(zhì)的配方是HNO3(有些用HCL代替)、H2O2和NaOH；

四種物質(zhì)的配方為除上述三種物質(zhì)外還加入一種表面活性劑。如CTAC、TritonX-100、Tween-20等以增強(qiáng)發(fā)光。

發(fā)光啟動試劑使用的HNO3，H2O2，和NaOH的濃度和體積不同，DMAE-NHS發(fā)光強(qiáng)度不同，采用如下組成時發(fā)光強(qiáng)度zui大，即（1）100μl0.1mol/LHNO3+0.1%H2O2（2）100μl0.25mol/LNaOH。

加入表面活性劑能增大DMAE-NHS的發(fā)光強(qiáng)度，試驗(yàn)了三種表面活性劑∶CTAC，TritonX-100，Tween-20對DMAE-NHS的發(fā)光強(qiáng)度的影響，2%TritonX-100的增強(qiáng)效果量好，能使DMAE-NHIS的發(fā)光強(qiáng)度增大4.5倍，2%Tween-20和0.2%CTAC使DMAE-NHS的發(fā)光強(qiáng)度分別增大3.5和2.8倍。加入TritonX-100或Tween-20能增加DMAE-NHS的發(fā)光強(qiáng)度而不引起本底增加，但加入CTAC時引起本底增加很多，故不宜使用CTAC做增強(qiáng)劑。

吖啶酯DMAE-NHS的熱穩(wěn)定性

DMAE-NHS的熱穩(wěn)定性隨pH值增大和溫度升高而降低，室溫（20℃）下，DMAE-NHS在pH為5.8，7.0，8.0的PB緩沖液中均較穩(wěn)定，16天后發(fā)光活性分別降低1.6%、3.6%和8.3%。37℃下，DMAE-NHS在pH為5.8，7.0，8.0的水溶液中，經(jīng)過16天后的發(fā)光活性分別降低8.9%、22%和42%。

吖啶酯DMAE-NHS的水解性

DMAE-NHS在水溶液中的發(fā)光活性隨時間而降低的原因是因?yàn)榘l(fā)生水解，在堿性環(huán)境中有利于水解，升高溫度也有利于水解，即DMAE-NHIS的水解速度隨溶液pH值增大和溫度升高而加快。在4℃或冰凍條件下，DMAE-NHS在pH為7.0的0.1mol/L PB緩沖液中穩(wěn)定，保存半年后，其發(fā)光活性沒有下降。

德晟吖啶酯DMAE-NHS的優(yōu)勢

吖啶酯DMAE-NHS與傳統(tǒng)吖啶酯相比，發(fā)光效率更高，熱穩(wěn)定性更好，親水性更強(qiáng)一些，該化學(xué)發(fā)光試劑光量子產(chǎn)率高、背景低，與蛋白、抗原，抗體等偶合后，發(fā)光效率幾乎不受影響，從而成為優(yōu)良的化學(xué)發(fā)光免疫分析標(biāo)記試劑。