許多生物學(xué)實驗都需要使用緩沖液來維持有效的pH，這很重要，因為蛋白質(zhì)和酶對pH的變化敏感，因此為當(dāng)前和下游實驗選擇正確的緩沖液至關(guān)重要。在本文中，我將簡要討論HEPES和PIPES在配置及使用過程中要考慮的一些重要因素，希望能對大家有所幫助。

如何制作HEPES及使用注意事項

HEPES是兩性離子Good's緩沖液，在6.8至8.2的pH范圍內(nèi)有效。這使HEPES在生理pH值下成為有效的緩沖液。該緩沖液可用于多種生物的細胞培養(yǎng)基中。它也可用作蛋白質(zhì)研究中的結(jié)合緩沖液，用于陽離子交換洗脫實驗中，以及在凝膠電泳中用作運行緩沖液。

HEPES的制備步驟：

要制備1升1M HEPES緩沖溶液，請將238.30 g GoldBio HEPES溶解 在750 mL dH 2 O中。使用10N氫氧化鈉調(diào)節(jié)至所需的pH。您可以在1M HEPES PDF協(xié)議中使用一張表。用dH 2 O填充至終體積1L，并通過過濾器或高壓釜滅菌。將緩沖液儲存在4℃。如果您使用的是HEPES鈉鹽，請改用HEPES-Na方案。

注意事項：

HEPES可溶于水，價格便宜，并且通常具有生物惰性。但是，它確實參與了產(chǎn)生自由基的氧化還原反應(yīng)，并干擾了DNA和限制性內(nèi)切酶之間的反應(yīng)，但是由于空間位阻，其干擾程度小于Tris。同樣重要的是要注意，當(dāng)使用異質(zhì)連接蛋白通道時，不應(yīng)使用HEPES，因為它會抑制其功能。如果要進行毒性研究，請選擇HEPES鈉鹽而不是游離酸。

如何制作PIPES及使用注意事項

PIPES是哌嗪緩沖液家族的一員，與HEPES屬于同一家族。它是兩性離子Good's緩沖液，在6.1至7.5的pH范圍內(nèi)有效。由于pH范圍與HEPES略有不同，PIPES的濃度僅為HEPES濃度的一半。該緩沖劑不會與金屬絡(luò)合，因此可用于含金屬離子的溶液。它也可以用于色譜分析，電子顯微鏡固定植物細胞，以及代替草甘膦緩沖液。

PIPES的制備步驟：

要制備1升1M PIPES游離酸緩沖溶液，請將302.37g  PIPES游離酸添加到600 mL dH 2 O中。使用10N氫氧化鈉調(diào)節(jié)至所需的pH值。您可以在1M PIPES PDF協(xié)議中使用一個表。用dH 2 O填充至終體積1L，并使用過濾器或高壓滅菌器滅菌。儲存在4?C。如果您使用的是PIPES鈉鹽，請改用1M PIPES-Na PDF協(xié)議。

注意事項：

直到溶液的pH值升高到6.5以上時，PIPES的游離酸才容易溶解，但是PIPES的鈉鹽很容易溶解。如果使用的是游離酸形式的緩沖液，請使用氫氧化鈉將其轉(zhuǎn)化為鈉鹽，以提高在較低pH下的溶解度。像HEPES一樣，PIPES不適用于涉及氧化還原反應(yīng)的實驗，因為它會導(dǎo)致自由基的形成。